|
Введение
На протяжении всей нашей истории человек заботился лошади, возможно больше, чем о других домашних животных. Содержанию, уходу, кормлению и поению лошади всегда уделялось особое внимание.
Такое отношение к этому животному не случайно. Оно складывалось веками, которые человек вместе с лошадью, в буквальном смысле бок о бок, прошел путь от первых ступеней цивилизации до сегодняшних дней. И, несмотря на то, что лошадь во многих областях человеческой деятельности утратила свое доминирующее положение, в сравнении с другими животными она остается любимым животным для человека.
В таких областях человеческой деятельности как конный спорт, конный туризм, работа в отдаленных регионах, в горных условиях, на пограничных рубежах роль лошади возрастает, и ее поголовье увеличивается. Увеличивается поголовье лошадей и в хозяйствах, в которых они разводятся как продуктивные животные для получения молока, мяса, продуктов создания медицинских препаратов.
Растущий интерес человека к лошади подтверждается созданием новых конно-спортивных комплексов и конюшен как в частном секторе, так и в общественных организациях.
Коневодство в Казахстане является специфической традиционной отраслью. Продукты из конины - мясо, кумыс, деликатесные изделия: казы, жал, жая, карта пользуются у населения большим спросом. Неуклонно растет спрос лошадей на международном рынке.
Еще в далеком прошлом Казахстан славился коневодством. Лошади отличались необыкновенной выносливостью, неприхотливостью, хорошей приспособленностью к круглогодовому табунному содержанию.
Разведение лошадей особенно выгодно в пустынной и полупустынной части республики и в районах горных пастбищ.
Сап - общая заразная болезнь, свойственная преимущественно лошадям; у человека она протекает то остро, то хронически. На первый план клинической картины выступают то явления общего отравления, то образование специфических узелков некроза в различных тканях и органах.
Человек обычно заражается при соприкосновении с больными животными, их трупами, шерстью, фуражом, подстилкой, загрязненными выделениями. Возбудитель проникает в организм через микротравмы на коже и слизистых или через рот посредством загрязненных возбудителем рук, а также аспирационным путем.
Естественная восприимчивость людей невысокая, заболевание возникает в основном на фоне нарушения иммунного статуса организма.
Обычно заражения носят профессиональный характер: болеют работники животноводства, лица, связанные с уходом за лошадьми, ослами, мулами, ветеринарные специалисты. Известны случаи внутрилабораторного заражения воздушно-пылевым путем.
Несмотря на отсутствие разработанных методов предохранения и лечения сапа, успешная борьба с ним всё же возможна; она базируется на мероприятиях ветеринарно-санитарного характера. Современные научные данные о биологии сапной бациллы и изучение эпизоотологических факторов, уясняющих пути и способы распространения инфекции, а также чувствительные биологические методы для распознавания заразы, чрезвычайно облегчают борьбу с сапом. В настоящее время совершенно ясно, что сущность борьбы сводится, с одной стороны, к уничтожению лошадей, способных рассеивать заразу, а с другой - к обособлению всех лошадей, не имеющих клинических признаков сапа, но положительно реагирующих на-маллеин. Мы знаем также, что зараза передаётся, главным образом, через пищеварительный тракт при поедании корма или с пойлом, которые загрязнены больными лошадьми, постоянно выделяющими сапных бацилл.
Организация «маллеиновых» хозяйств с последующей концентрацией маллеинщиков в особых районах создаёт благоприятные перспективы и возможности в дальнейшей борьбе за окончательную ликвидацию сапа лошадей.
1.ОБЗОР ЛИТЕРАТУРЫ
Сап (malleus) - инфекционная болезнь лошадей, ослов, мулов и других непарнокопытных семейства лошадиных, характеризующаяся образованием специфических сапных узелков, склонных к некрозу. Сап вызывается бактериями вида Pseudomonas mallei; может также передаваться человеку.
Историческая справка
Болезнь известна еще с древности, она наносила большой экономический и социальный ущерб во все времена.
Первые упоминания о сапе как о заразной болезни приведены в трудах Аристотеля в IV в. до н. э. Но только во второй половине XIX в. был открыт возбудитель сапа и созданы первые средства диагностики. Возбудитель сапа обнаружен ученым Бабешем в мазках из гноя и в гистологических срезах из пораженных тканей, но выделить культуру ему не удалось. Впоследствии Лёффлер и Шюц выделили культуру возбудителя сапа, изучили его устойчивость во внешней среде и патогенность для животных различных видов.
В 1891 г. два русских ветеринарных врача Гельман и Калнинг приготовили малеин, который применяется сейчас во всем мире для аллергической диагностики сапа. Благодаря применению жестких мер борьбы распространение сапа постепенно уменьшается. Он еще сохранился в странах Ближнего Востока, Азии и других районах земного шара. В последние годы болезнь регистрировалась в Монголии, Пакистане, Китае, Индии, Индонезии, Юго-Восточной Азии и других регионах. На территории России сап был ликвидирован в конце 50-х годов XX в. В некоторых странах Европы, например во Франции, отмечаются отдельные случаи сапа у импортированных лошадей (Тома, 1976), что свидетельствует о необходимости тщательного обследования всех импортируемых животных.
Болезнь следует, однако, изучать и в тех странах, где она исчезла (к ним относится и Румыния), чтобы предотвратить ее повторное занесение из других зон земного шара. Отметим, что успеха в лечении сапа у человека с помощью сульфаниламидных препаратов добился румынский ветеринарный врач и ученый Николае Мунциу.
2.Эпизоотологическая обстановка по сапу в Казахстане
Впервые сап в Казахстане зарегистрирован экспедицией профессора Харьковского ветеринарного училища Островским, который в 1853 г. отметил это заболевание в Букеевской степи. Дореволюционная ветеринарная служба 50-60-х годов XIX века не имела точного представления о размерах распространения сапа лошадей в Казахстане. Выяснять его распространение начали в 90-х годах прошлого века в Уральской области А. П. Петровский, Тургайской - В. Я. Бенкевич и Сталь, Акмолинской - Д. Н. Касаткин и Дорофеев, Семиреченской - В. Н. Колпаков. Отсутствие государственного закона по борьбе с сапом и невозможность изоляции распространению сапа, тем более при широком обмене и торговле лошадьми. К. Туркин (1890 г.) отмечал неорганизованность ветеринарного дела и считал это основной причиной возникновения и развития различных эпизоотии и эпидемий. Он указывал, что «сап культивируется самым естественным способом, путем тесного общения больных лошадей со здоровыми, и прогрессирует у нас с каждым годом все вперед и вперед».
С 1896 по 1911 г. в Тургайской области было убито 1188 сапных лошадей, в среднем ежегодно там насчитывалось более 50 неблагополучных пунктов по этому заболеванию. В годы, предшествовавшие первой мировой войне, сап лошадей в Тургайской области не имел тенденции к снижению. С 1912 по 1914 г. было убито более 4 тыс. сапных лошадей. Однако эти цифры не отражают истинного распространения эпизоотии, потому что маллеинизация в то время не проводилась.
Сап лошадей в Уральской области был зарегистрирован в 1881 г. С 1892 по 1902 г. там обнаружено 1572 сапные лошади. В Акмолинской области это заболевание установлено в 1896 г. Основная масса неблагополучных по сапу пунктов находилась в Петропавловском, Кокчетавском, Акмолинском и Атбасарском уездах.
В Казахстане наблюдался рост числа выделяемых сапных лошадей. Это в значительной мере объясняется тем, что стало больше ветспециалистов и улучшился статистический учет. Особенно много больных было выделено за первые пять месяцев 1914 г., когда увеличились закупки лошадей для военного ведомства и проводился их ветеринарно-саннтарный осмотр, при котором и выявлялись сапные животные.
Маллеин для выявления скрытых форм сапа применялся исключительно редко. С 1904 по 1910 г. было промалленизировано однократно 2389 лошадей, повторно- 1156. В городе Верном с 1904 по 1908 г. промалленнизирована всего одна лошадь. Между тем широкое применение маллеина позволило бы выявить большое количество животных со скрытой хронической формой сапа. Так, в 1898 г. в Ковальском уезде Семиреченской области было промалленпизировано 22 лошади, из них положительно реагировало 17, в Тургайской области в 1903 г. из 40 голов - 33 животных.
Только в Советском Казахстане представилась возможность проводить широкие, целеустремленные, плановые противосапные мероприятия.
В двадцатых годах ветеринарная служба Казахстана строила борьбу с сапом еще по-старому. Только с 1923 г. начинают суммироваться в отчетности далеко несоответствующие истине сведения о движении сапа в республике. С 1922 по 1925 г. маллеинизацию, как и серологические методы, применяли почти исключительно для уточнения диагноза, когда животных подозревали в заражении сапом. Очень редко малленнизировали лошадей неблагополучных пунктов. С 1929 г. начинают проводить плановые мероприятия по борьбе с сапом, хотя планирование ветеринарной работы в то время было схематичным и ориентировочным. Ветеринарная организация Казахстана только в 1931 г. получает настоящие возможности для борьбы с сапом. Эти возможности появились благодаря коллективизации сельского хозяйства.
В 1932 г. были почти полностью обследованы на сап лошади в Павлодарской, Восточно-Казахстанской, Семипалатинской областях и в ряде наиболее неблагополучных районов других областей, смежных с Западной Сибирью и Средней Азией. Всего клинически обследовано 375,5 тыс. лошадей, промаллеинизировано - 353,2, исследовано по РСК - 21,8, повторно обследовано и промаллеинизировано 35,2 тыс. животных. В 1932 г. но сравнению с 1928 г. в Казахстане было промаллеинизировано лошадей в 36 раз больше, с 1931 г.- почти в 2 раза.
Этими работами установлено, что Казахстан в тот период являлся одним из самых неблагополучных по сапу районов СССР. На борьбу с сапом были мобилизованы работники всех советских, партийных и хозяйственных органов.
В 1933 г. клинически обследовано 276,3 тыс. лошадей, промаллеинизировано- 256,2, ликвидировано 63% всех выявленных, неблагополучных пунктов против 42% в 1932 г., причем в Актюбинской - 98%, Южно-Казахстанской - 64, Алма-Атинской - 55, Карагандинской - 53%.
Благодаря ежегодным плановым противосапным мероприятиям сап лошадей как эпизоотия в Казахстане был ликвидирован к 1939 г.
Возбудитель
Возбудитель - Actinobacillus mallei - прямая или изогнутая, с закругленными концами, неподвижная бактерия, длиной 1-5 мкм, шириной 0,3 - 0,8 мкм.
В мазках из патологического материала и питательных сред микробы чаще располагаются в виде цепочки или нитей. Возбудитель сапа не образует спор и капсул, хорошо красится анилиновыми красками, грамотрицателен.
Окрашивание синькой Лёффлера и краской Гимзы хорошо выявляет зернистость внутренней структуры микроба. Аэроб, растет на обычных питательных средах с добавлением 1 - 5 % глицерина.
Дифференциальной считают картофельную среду, на которой возбудитель сапа образует слизистые от янтарно-желтого до буро-коричневого цвета колонии, имеющие вид медового налета.
Устойчивость к действию факторов внешней среды низкая. При температуре 55° С палочка сапа погибает в течение 10-15 мин, при нагревании до 80 °С гибнет через 5 мин.
Высыхание и свет убивают ее за 5-6 дней.
В воде и влажной среде она сохраняет вирулентность 10-12 дней. В гниющих материалах возбудитель сохраняется до 30, в высушенных носовых истечениях до 15 дней. Антисептики и дезинфектанты, такие, как сулема, 3%-ный раствор крезола и 2%-ная серная кислота, убивают ее за несколько минут. Взвесь хлорной извести с содержанием 5 % активного хлора, растворы карболовой кислоты (2 %-ный), едкого натра (1 %-ный), лизола, креолина (3 %-ный) быстро убивают возбудителя сапа.
Эпизоотологические данные.
В естественных условиях сапом обычно болеют однокопытные: лошади, ослы, мулы, лошаки. Наиболее чувствительны ослы и мулы, и болезнь у них протекает остро. Лошади сравнительно менее чувствительны и переболевают преимущественно хронически. Весьма восприимчивы хищники из семейства кошачьих (львы, тигры, пантеры, рыси и др.), бурые и белые медведи при поедании контаминированного возбудителем мяса (летальный исход). Сравнительно редко заболевают верблюды. Болеет сапом и человек.
Источники возбудителя инфекции - клинически и бессимптомно больные животные, выделяющие Р. mallei преимущественно с носовыми, истечениями, с мокротой при кашле и гноем кожных язв, а при заглатывании мокроты - и с калом. Инфицированные экскреты контаминируют корма и воду, через которые и происходит заражение (алиментарный путь).
При кожном сапе возможен контактный путь заражения через поврежденную кожу - прямо и косвенно (сбруя, инвентарь, подстилка и т. р.), а также при случке.
При легочной и носовой формах сапа возбудитель передается воздушным путем (с аэрозолью мокроты при кашле, обнюхивании, облизывании и т. д.). В табунном коневодстве преобладает воздушно-пылевой путь передачи возбудителя сапа.
Между хозяйствами и табунами сап обычно распространяется с клинически и латентно бальными лошадьми. Инфицированные животные месяцами могут иметь хорошую упитанность и, оставаясь своевременно не выявленными и изолированными, перезаражают здоровых лошадей.
Сап среди лошадей распространяется сравнительно медленно. При хроническом и латентном течении болезни выделение возбудителя и инфицирование объектов внешней среды незначительны и непостоянны. Но при тесном размещении лошадей в сырых, плохо вентилируемых помещениях, бесхозяйственности, беспорядочном использовании станков без предварительной дезинфекции болезнь может за короткое время быстро и широко распространиться и охватить значительную часть поголовья животных. Особенно благоприятные условия для перезаражения, если пользуются общими кормушками, водопойными корытами, ведрами, торбами, при бесконтрольном перемещении (перевозках) животных, а также при пастбищном табунном содержании лошадей.
В стационарно неблагополучных по сапу хозяйствах (странах) среди пораженных животных преобладает латентное течение болезни, при котором отсутствуют не только клинические признаки, но иногда временно выпадает и реакция на маллеин (ГЧЗТ). Особенно это относится к полудиким животным. Резкое, изменение условий содержания, бескормица, усиленная эксплуатация, перевоз животных в другие природно-климатические условия (акклиматизация) обычно у таких лошадей вызывают обострение скрытого сапного процесса, вплоть до явной инфекции.
Одно время сап был широко распространен в Европе, но с введением мер по борьбе с ним заболеваемость в большинстве стран стойко снизилась, однако он все еще встречается в Азии, Африке и Южной Америке, но не выявляется в США и в западной Европе. Сап никогда не был распространенной болезнью человека; однако единичные случаи заболевания могут иметь весьма тяжелое течение. В США с 1938 г. не было зарегистрировано естественного заражения сапом.
Сап - болезнь, поражающая главным образом лошадей, мулов и ослов, хотя козы, овцы, кошки и собаки иногда заражаются ею. Описана инфекция львов в заповедном парке в Италии, возникшая в результате использования для кормления этих животных импортированного мяса лошадей. Свиньи и крупный рогатый скот резистентны к инфекции. У лошадей болезнь может носить системный характер с преобладающим поражением легких (сап) или может проявляться образованием подкожных изъязвляющихся очагов и лимфоидным отеком с узелковыми образованиями (сапный отек). Заражение животных может осуществляться при ингаляции, заглатывании или внедрении возбудителя через дефекты кожных покровов.
Среди людей заболевание развивается главным образом у лиц, имеющих тесный контакт с лошадьми, мулами или ослами, при внедрении возбудителя через поврежденные участки кожи или соприкосновении слизистых оболочек носовой полости с контаминированными выделениями больного животного. Описан целый ряд примеров аэрогенного заражения лабораторных работников.
Патогенез.
Возбудитель сапа, попав в организм любым путем, проникает в лимфатические пути и кровь и разносится по всему организму. Чаще сапной процесс локализуется в легких (84-100% случаев), носовой полости (56 - 95%) и в коже (до 13%); другие органы поражаются значительно реже. В местах размножения возбудителя развивается специфическое воспаление экссудативного, продуктивного или экссудативно-продуктивного характера.
В пораженных органах образуются мелкие сапные узелки, быстро подвергающиеся некротическому распаду, вокруг которых формируется соединительнотканная капсула. У более резистентных животных инкапсулирование сапных узелков происходит быстрее и может завершиться их обызвествлением. Инфекционный процесс при этом принимает хроническое течение. Латентная форма болезни иногда заканчивается выздоровлением животного.
У животных с пониженной резистентностью отграничение сапных узелков происходит слабее, вокруг них появляются инфильтраты, возникает множество новых фокусов (миллиарный сап). В легких процесс протекает в виде лобулярно-лобарной пневмонии. В носовой полости некротический распад узелков приводит к образованию язв и даже к распаду носовой перегородки. При поражении кожного покрова в области головы, шеи, тазовых конечностей образуются мелкие узелки и гноящиеся язвы.
Общее состояние животного и характер проявления клинических признаков сапа обусловлены поступлением в кровь экзо- и эндотоксинов возбудителя (факторы вирулентности) и продуктов распада тканей, интенсивностью развития сапного процесса и местом его локализации в организме (легкие, носовая полость, кожа, печень, почки, селезенка).
Длительность течения сапного процесса у лошадей - от нескольких дней до 7 лет. Хроническое течение сапа отмечалось у 87% больных лошадей (С. Н. Вышелесский, 1940), периодически чередовалось обострением инфекционного процесса и проявлением более четких клинических признаков болезни. При рецидиве у хронически больных сапом лошадей температура тела поднимается до 39 - 40 °С и сохраняется от нескольких дней до нескольких недель, совпадая с появлением новых сапных фокусов. Периоды ремиссии могут продолжаться многие месяцы. При полноценном кормлении и умеренной эксплуатации латентно больные сапом лошади могут долго оставаться в хорошем состоянии.
Таким образом, через слизистые оболочки ротовой полости и кишечника, с током лимфы возбудитель сапа проникает в лимфатические узлы, затем в кровяное русло и паренхиматозные органы, в первую очередь в легкие, где вызывает специфическое воспаление, характеризующееся образованием сапных узелков. Их развитие начинается резкой гиперемией пораженного участка, выпотеванием серозно-фибринозного экссудата и скоплением в центре макрофагов, среди которых появляются гигантские клетки. В центре узелка клетки вскоре гибнут и подвергаются казеозному распаду. При благоприятном исходе болезни происходят инкапсулирование и обызвествление образовавшегося очага некроза. Если же резистентность организма невелика, то вокруг первичного очага образуются новые сапные узелки. Такой процесс в легких приводит к выраженной пневмонии, образованию каверн; в носовой полости - к прогрессивному дифтеритическому воспалению и обширному язвенному поражению слизистой оболочки и даже хряща; в коже - к появлению множества мелких узелков и гноящихся язв.
Течение и симптомы.
Инкубационный период от 3 сут до 2-3 недель. Сап протекает остро, хронически и латентно. По месту локализации патологического процесса условно различают носовой, лёгочный (лёгкие поражаются почти в 100% случаев) и кожный сап.
Легочный сап. Развивается очень медленно и часто протекает незамеченным. Болезнь затягивается на месяцы и даже годы. Первые признаки болезни состоят в периодическом подъеме температуры тела, особенно в вечерние часы. Постепенно развивается общая слабость, которая сопровождается понижением работоспособности, быстрой утомляемостью, одышкой, нарастающим исхуданием. Появляется кашель, иногда в легких прослушиваются хрипы. Все это приводит к общему упадку сил и кончается смертью.
Носовой сап. Начинается умеренным покраснением слизистой оболочки носовой полости, из одной или обеих ноздрей появляется слизистое беловато- или серовато-желтое истечение (иногда с примесью крови), которое засыхает корочками вокруг крыльев носа и затрудняет дыхание. На слизистой оболочке носовой перегородки с одной или обеих сторон видны очень мелкие сапные узелки (бугорки) серовато-желтого цвета. Сапные узелки постепенно распадаются и превращаются в язвы с острыми неровными краями (рис. 152) и желтым саловидным дном. Отдельные язвы могут сливаться вместе и вызывать прободение носовой перегородки. Заживление сапных язв происходит очень медленно, и на их месте образуются звездчатые рубцы. Осматривать носовую полость лошади на сап следует всегда с рефлектором. При хронической форме сапа подчелюстные лимфатические узлы резко увеличиваются в объеме (до куриного яйца и больше), становятся плотными, бугристыми, малоподвижными, на ощупь холодными и неболезпенными; нагноения их не бывает.
Кожный сап. По ходу воспаленных лимфатических сосудов в коже или под кожей образуются сапные узлы, которые разрушаются (без нагноения) и образуют глубокие язвы с саловидным дном. Чаще всего поражаются задние конечности. В результате длительного течения болезни происходит значительное утолщение больной ноги - слоновость.
Эти формы сапа чаще всего протекают вместе, с обострением или угасанием клинических признаков болезни.
Сап распознают:
) выявлением клинических признаков болезни;
) применением маллеиновой пробы;
) исследованием сыворотки крови методом реакции связывания комплемента (РСК) для выявления активных форм сапа.
Глазная маллеинизация (офтальмомаллеинизация) заключается в нанесении 2-3 капель маллеина пипеткой на неизмененную конъюнктиву глаза. Реакцию учитывают через 3-6-9-12 и 24 часа.
Положительная реакция - покраснение и набухание конъюнктивы глаза, слезотечение и выделение гноя (в виде шнура) из внутреннего угла глаза.
Сомнительная реакция - покраснение конъюнктивы, припухлость и слезотечение, без образования гноя.
Отрицательная реакция - слизистая оболочка глаз остается без изменений.
При сомнительной реакции глазную пробу повторяют на 5 - 6-й день в тот же глаз.
Пипетка для введения в глаз маллеина должна быть стерильной. Маллеинизацию следует проводить рано утром и в течение дня следить за реакцией. До окончания реакции лошадей не кормят и не поят. Лошадь ставят на развязке головой к проходу. При наличии у лошадей конъюнктивита обоих глаз и при всех других заболеваниях глаз офтальмо маллеинизацию не проводят.
Подкожную маллеинизацию производят так же, как и туберкулинизацию, в том же порядке учитывают реакцию. Подкожную маллеинизацию проводят в ветеринарной лечебнице под непосредственным наблюдением ветеринарного врача.
Видимые клинические признаки сапа появляются спустя 4 недели и даже значительно позже: после естественного заражения. Болезнь может протекать остро и хронически в легочной носовой и кожной формах, а также латентно. При остром течении отмечают общие нехарактерные симптомы: лихорадку (41-42 С), угнетение, анорексию, дрожание мышц, слабый пульс, частое и прерывистое дыхание. Хотя в таких случаях постоянно поражаются легкие, кашель, влажные хрипы, усиленное везикулярное дыхание регистрируют редко. Острые формы сапа бывают преимущественно у жеребят и у молодых неакклиматизированных лошадей при массовом их заражении.
Наиболее характерные клинические признаки болезни при носовой и кожных формах сапа проявляются обычно спустя некоторое время после общих симптомов. При поражении носовой полости вначале возникают красные пятнышки, переходящие через 2-3 дня в мелкие желтоватые узелки (дифтеритическое воспаление), со склонностью к быстрому некротическому распаду; на их месте образуются круглые или овальные язвы. Сопровождается это выделением слизисто-гнойного экссудата, иногда с примесью крови. Язвы становятся кратерообразными с неровными подрытыми краями. Они могут сливаться, образуя обширные изъязвления слизистой вплоть до распада носовых раковин и перегородки. Такому процессу соответствует обильное истечение из одной или обеих ноздрей; и сопящее дыхание. При гнойно-некротическом рините закономерно поражаются регионарные лимфоузлы. Сперва они болезненны, увеличены и горячие, а затем становятся плотными, неподвижными и безболезненными. Если острый процесс затягивается, носовые язвы могут заживать и на их месте образуются звездчатые рубцы. Поражения при кожной форме сапа чаще локализуются на голове, шее, конечностях и препуции. Вначале на коже появляются отечные болезненные припухлости, после рассасывания которых возникают плотные узлы с последующим их распадом и образованием гноящихся язв с изрытыми неровными краями. Развивается подкожный; лимфаденит с четкообразными утолщениями по ходу воспаления сосудов. Вскоре наступает их размягчение и вскрытие.
Легочная форма развивается сравнительно медленно. Ей предшествуют слабовыраженные общие симптомы, свойственные острому течению, затем в симптомокомплексе начинают доминировать клинические признаки легочного сапа: быстрая утомляемость, постепенное исхудание, слабый кашель со слизисто-гнойными и кровянистыми хлопьями мокроты. При развитии пневмонии, и появлении каверн - притупленный перкуторный звук; усиленное везикулярное, иногда бронхиальное дыхание, влажные хрипы.
Легочная, носовая и кожная формы - это лишь клиническое органное проявление общего сапного процесса. Чаще острое течение болезни наблюдают у ослов и мулов и реже - у лошадей. Длится она 8-30 дней и обычно заканчивается смертью или принимает хроническое течение.
Хронический сап протекает месяцами и даже годами, проявляясь настолько незначительными клиническими симптомами, что они долгое время остаются незамеченными. У больных животных может быть редкий сухой кашель, ремитирующая или интермиттирующая лихорадка, иногда эмфизема легких. На слизистой носа находят звездчатые рубцы, увеличенные плотные и безболезненные лимфоузлы, изредка слоновость тазовых конечностей. Периодически отмечают рецидивы болезни.
Латентный сап продолжается многие годы без проявления клинических признаков. Выявляют его только аллергическим исследованием. В настоящее время латентное течение регистрируют у большинства пораженных сапом животных в стационарно неблагополучных пунктах тех стран, где болезнь продолжает оставаться эпизоотологически значимой проблемой.
Хищные животные болеют острым сапом. У заболевших появляется хромота, затем слизисто-гнойный ринит и изъязвление кожи спинки носа, конечностей и хвоста. Развиваются общая слабость, септицемия, диарея, животные погибают спустя 1-2 недели после заражения.
Патологоанатомические изменения.
Труп вскрывают без снятия шкуры осматривают слизистые оболочки органов дыхания, обследуют легкие, печень, селезенку, лимфатические узлы головы и иных органов.
Трупы вскрывают лишь по требованию экспертизы (в некоторых неясных или спорных случаях) и с научной целью. Находят изменения в лёгких (сапные узелки, бронхопневмония <#"justify">Патологоанатомические изменения разнообразны, зависят от течения и формы проявления сапного процесса. На коже и в носовой полости могут быть сапные узлы и гноящиеся язвы, рубцы. В легких, печени, селезенке, лимфоузлах находят стекловидные, просвечивающиеся, окруженные пояском гиперемии сапные узелки и очаги с некротическим распадом тканей (острое течение) или инкапсулированные, пропитанные солями извести фокусы (хроническое течение). Если диагноз был поставлен при жизни животного, трупы вскрывать не рекомендуется.
Патологоанатомические изменения при сапе чаще всего устанавливаются в легких. Первоначально в них имеется серый полупрозрачный центр и красный ободок, в дальнейшем центр некротизируется и даже обызвествляется, а по периферии развивается капсула. Узелки могут сливаться друг с другом, и образуются узлы размером до лесного ореха. Возможны еще лобулярные формы, а также крупные бронхопневмонические гнезда с кавернами и плотным белым разростом соединительнотканного характера. В лимфатических узлах находят либо узелкового характера поражения с центральным некрозом иногда с обызвествлением и образованием капсулы, либо неспецифическии острый или хронический лимфаденит. На слизистых оболочках сапной процесс чаще всего протекает в виде узелкового поражения с дальнейшим изъязвлением.
Язвы могут заживать с образованием рубцов лучистого строения. Сап носовой полости может протекать и в форме неспецифического серозного ринита с последующим диффузным некрозом. В печени, селезенке обычно встречаются сапные узелки. При посмертной диагностике сапа необходимо учитывать частое наличие в легких и печени у лошадей узелков верминозной, реже другой этиологии. В ряде случаев отличить их от сапных возможно лишь гистологически.
3.Диагноз
При остром течении болезни, когда клинические признаки выражены достаточно четко, диагноз на сап может быть поставлен на основе анализа клинико-эпизоотологических данных. Однако сап часто протекает хронически или латентно, без ясных клинических признаков. Поэтому проводят аллергические исследования и серологические исследования. в виде офтальмо-маллеинизации и исследования крови методом РСК. Эти две реакции очень удачно дополняют одна другую и поэтому употребляются почти всегда совместно.
Офтальмореакция устойчиво проявляется в сапном организме при острой и хронической формах, а также при латентной и у большинства животных даже после их выздоровления. РСК, наоборот, наиболее полные показания дает при острой форме или вообще активном сапном процессе. Поэтому, чтобы выявить сапных лошадей, производят офтальмо-маллеинизацию, а чтобы дифференцировать форму сапного процесса реагирующих по маллеину лошадей, исследуют кровь по РСК.
Исследование сыворотки крови в РСК на сап проводят только у лошадей, положительно реагирующих на маллеин. Данный метод позволяет выделить животных с активным сапным процессом. Положительные показания только одной РСК при отрицательной реакции на маллеин не могут служить основанием для диагноза на сап.
В некоторых случаях прибегают к бактериологическому и гистологическому исследованиям, а также к биопробе на кошках или морских свинках.
Порядок исследования на сап лошадей. Лошади неблагополучного хозяйства делятся на четыре группы.
К первой группе относятся лошади с явной клинической картиной болезни ко второй с неясными клиническими признаками и положительной глазной реакцией, к третьей - без признаков, но с положительной глазной реакцией, к четвертой - все остальное конское поголовье.
Лошади первой группы немедленно уничтожаются. Вскрытие трупов лошадей, больных сапом, воспрещается. Вторая группа исследуется маллеином три раза в 1-й, 6-й и 15-16-й дни. При отрицательном результате офтальмореакции их относят к четвертой группе. В случае получения положительных или сомнительных результатов лошади уничтожаются.
Третью группу исследуют два раза по маллеину, а кровь по РСК. Лошади, давшие положительные результаты РСК и положительные или сомнительные офтальмо-маллеинизации уничтожаются.
Лошадей, давших давших сомнительный или отрицательный результат исследования крови, через 15 дней вторично исследуют по РСК. Лошади, давшие при вторичном исследовании положительный результат по РСК или двукратно сомнительный результат по РСК а также положительный результат на маллеин, подлежат уничтожению. Лошади, все время показывающие отрицательные результаты исследования крови и положительные при трехкратной глазной маллеинизации, зачисляются в группу маллеиновых лошадей. Под кожу им вводят 2 мл маллеина и на 9-15-й день исследуют кровь по РСК.
Лошади, давшие положительную РСК, признаются сапными и уничтожаются. Лошадей, давших положительные результаты глазной маллеинизации и отрицательные по РСК, зачисляют в группу маллеинщиков, а отрицательно реагирующих по обоим методам - в четвертую группу.
Жеребят от маток-маллеинщиков исследуют двукратно офтальмо-маллеинизациеи с промежутками в 5-6 дней, а кровь - по РСК и введением под кожу маллеина (2 мл). Жеребят, давших по всем видам исследований отрицательный результат, через один месяц повторно исследуют. В случае отрицательных результатов переводят в группу молодняка для изолированного выращивания.
Для аллергического исследования применяют маллеин. В практике используют глазной, подкожный и внутрикожный методы маллеинизации.
Глазная маллеинизация является основным методом диагностики сапа у лошадей, ослов, мулов и верблюдов. Маллеин вводят двукратно с промежутком 5-6 дней. Маллеинизацию проводят утром, при естественном освещении. Маллеин наносят стерильной пипеткой на конъюнктиву здорового глаза при оттянутом нижнем веке в количестве 3 - 4 капель Учитывают реакцию после первого введения маллеина через 3 - 6 - 9 и 24 ч. Реакцию признают положительной, если развивается гнойный конъюнктивит. В глазной щели скапливается гной, спускающийся в виде шнура из внутреннего угла глаза, или он находится только в конъюнктивальном мешке. Наряду с этим у некоторых лошадей наблюдают серозно-гнойное истечение из ноздри. Иногда положительная реакция наступает и в другом глазу.
При сомнительной реакции наблюдают гиперемию конъюнктивы, припухание век, слезотечение и незначительное скопление (капля) гноя в углу глаза.
При отсутствии реакции конъюнктива остается неизменной, иногда в первые 2 - 3 ч отмечают лишь слабое ее покраснение и небольшое слезотечение.
Животным, давшим сомнительную и отрицательную реакцию, маллеин вводят повторно через 5 - 6 дней в тот же глаз. Учет реакции проводят через 3 - 6 - 9 - 12 ч. В период маллеинизации животных держат на коновязи на короткой привязи или в конюшне, привязанными врастяжку, головой к проходу. Верблюдам глазную маллеинизацию проводят однократно. Глазная проба выявляет более 95 % больных сапом животных. У истощенных и ослабленных лошадей, а также с сильно прогрессирующим сапным процессом чувствительность к маллеину понижена.
Подкожную маллеинизацию проводят в тех случаях, когда нельзя применять офтальмопробу (болезни глаз), а также в случаях неясных показаний глазной маллеинизации. У лошадей предварительно измеряют температуру тела (утром, днем, вечером). Средняя температура не должна превышать 38,5 °С. Маллеин вводят подкожно в дозе 1 мл в области шеи. Температуру тела начинают измерять на другой день в 6 ч утра и продолжают через каждые 2 ч до 18-го ч, затем на 24-м и 36-м ч. Оценивают реакцию по показаниям температуры тела и интенсивности развития местной реакции.
Реакцию признают положительной, если температура тела поднимается до 40 °С и в течение 6 - 8 ч удерживается на этом уровне, а затем постепенно снижается до нормы. На месте введения маллеина имеется местная реакция (может быть и незначительная). Положительной реакцию считают также и в том случае, когда на месте введения маллеина развивается сильно выраженная, горячая, болезненная припухлость и температура тела поднимается выше 39,6 °С.
При сомнительном результате местная реакция выражена слабо, температура тела поднимается выше 39 °С, но не выше 39,6 °С, возможно отсутствие местной реакции, но температура тела поднимается выше 40 °С.
Подкожная проба считается отрицательной, если на месте введения маллеина воспалительная припухлость не образуется или возникает незначительная местная реакция, температура тела остается в пределах нормы или повышается, но не выше 39 °С. Подкожная проба выявляет до 95 % больных сапом животных, но по технике выполнения она довольно трудоемкая.
Внутрикожным методом исследуют полудиких табунных лошадей, так как другими методами исследовать их очень трудно. Маллеин в дозе 0,2 мл вводят внутрикожно в области шеи и реакцию учитывают через 48 ч. Положительная реакция характеризуется развитием на месте введения маллеина строго очерченной тестоватой консистенции, горячей, болезненной припухлости величиной 2 х 3,5 см или 14,5 х 25 см. Отобранных на экспорт лошадей исследуют дважды. Нереагирующим лошадям второй раз маллеин вводят через 48 ч, учет реакции проводят через 24 ч. Этот метод по диагностической ценности не уступает глазному методу.
Лабораторная диагностика включает микроскопическое исследование отделяемого материала из язв, полости носа, пунктатов из лимфатических узлов и абсцессов; выделение чистой культуры при посевах патологического материала на питательные среды, содержащие картофель, агар и бульон с 3 % глицерина; заражение исследуемым материалом или выделенной культурой самцов гвинейских свинок внутрибрюшинно, серых мышей или кошек - под кожу затылка; реакцию связывания комплемента с учетом нарастания титра антител; кожно-аллергическую пробу с малеином - внутрикожно или накожно (на скарифицированную кожу предплечья) вводят 0,1 мл малеина в разведении 1 : 100- 1 : 1000. Учет реакции проводится через 24-48 ч. Проба становится положительной с 10-15-го дня болезни.
Клинический осмотр.
При клиническом осмотре обращают внимание на состояние кожного покрова, поверхностных лимфатических узлов и сосудов, слизистой оболочки носовой полости, общее состояние здоровья животного. При носовом сапе на слизистой оболочке носовой полости появляются мелкие желтоватые узелки, окруженные красным ободком. На их месте образуются характерные язвы и звездчатые рубцы. Развитие язв сопровождается гнойным истечением из носа, иногда с примесью крови, а также припуханием подчелюстных лимфатических узлов. При сапных поверхностных поражениях кожи наблюдают пустулу, язву с гнойным содержанием или заполненную грануляционнной тканью, или рубец. При глубоких поражениях в толще кожи обнаруживают плотные узлы с гнойно-некротическим содержанием на разрезе, язвы или рубцы, которые могут быть расположены по ходу лимфатических сосудов. При поражении легких наблюдается слабый глухой кашель, быстрая утомляемость животного, периодические подъемы температуры тела выше 38,5 гр.С.
Аллергическое исследование.
Для аллергического исследования на сап применяют маллеин, представляющий собой стерильный культуральный фильтрат возбудителя сапа, выращенного на жидкой питательной среде.
При диагностике болезни применяют двукратную глазную и подкожную маллеиновые пробы.
Глазная маллеиновая проба.
Перед проведением исследования лошади (ослы, мулы) должны быть в течение суток освобождены от физической нагрузки и содержаться на привязи. Обследование животных, имеющих конъюнктивиты и другие заболевания глаз, глазной пробой не проводят. Обследуемым животным наносят 3-4 капли маллеина с помощью глазной пипетки на конъюнктиву одного глаза при оттянутом нижнем веке. Реакцию учитывают через 3,6,9,12, и 24 часа путем осмотра слизистой оболочки глаза. Положительная реакция характеризуется длительной или кратковременной гиперемией и опуханием конъюнктивы разной степени с гнойным истечением из внутреннего угла глаза, или скоплением гноя в конъюнктивальном мешке.
Реакцию считают отрицательной при отсутствии каких-либо изменений, или при слабом покраснении конъюнктивы и слезотечении. Животным, не реагировавшим на первую аппликацию аллергена, препарат через 5-6 сут. наносят повторно в той же дозе на конъюнктиву того же глаза.
Подкожная маллеиновая проба.
Подкожную маллеиновую пробу применяют не ранее 1,5 мес. после предыдущей подкожной пробы. Перед ее проведением животных выдерживают на привязи не менее суток и поят подогретой водой. У лошадей (ослов, мулов) измеряют температуру тела в 7-8, 14-15 и 21-22 ч.
Обследование животных с кратковременным или длительным повышением температуры до 39 гр.С и выше подкожной маллеиновой пробой не проводят. Маллеин животным вводят подкожно в области подгрудка в количестве 1 куб.см. Общую температурную реакцию тела и местную реакцию в области введения аллергена учитывают через 6-8, 10-12, 14-16, 20-24 и 30-36 ч. Положительная реакция характеризуется постепенным подъемом температуры до 39,6 гр.С и выше и медленным ее спадом с возможным слабым вторичным подъемом через 30-36 часов, а также образованием в месте введения маллеина воспалительной припухлости разной степени выраженности. Реакцию считают отрицательной при нормальной температуре тела или кратковременном подъеме ее не более 39,5 гр.С и отсутствии изменений в месте введения маллеина.
Серологическое исследование.
Пластинчатая реакция агглютинации с сапным цветным антигеном (РА).
Антиген сапной цветной для пластинчатой РА представляет собой гомогенную взвесь в буферном растворе инактивированной окрашенной культуры возбудителя сапа. При хранении допускается образование осадка, переходящего в гомогенную взвесь при встряхивании. Перед употреблении флакон с антигеном выдерживают в течение 15-20 мин. при температуре (18-30)гр.С и встряхивают. Испытуемая сыворотка крови лошадей, нативная или консервированная. Консервирование сыворотки крови проводят кристаллами борной кислоты (2-4% к объему сыворотки) до получения насыщенного раствора или путем однократного замораживания.
Не консервированная сыворотка крови пригодна для исследования в течение 5 суток со дня взятия крови с сохранением ее при температуре (4-8)гр.С. Сыворотка, консервированная борной кислотой, пригодна для исследования в течение 10 суток, замороженная сыворотка - в течение 3 суток после однократного оттаивания. Мутные, проросшие, гемолизированные сыворотки крови исследованию на сап не подлежат.
Сыворотка сапная для РА и РСК (позитивная сыворотка), изготавливается на биопредприятии. Сыворотка крови лошадей неспецифическая не консервированная (неготивная сыворотка), изготавливается на биопредприятии. Физиологический раствор - 0,85%-ный раствор хлорида натрия рН 6,8-7,2.
Коррекцию рН проводят 10%-ным раствором соляной кислоты или 10%-ным раствором гидроокиси натрия.
Постановка РА.
Реакцию проводят на чистых сухих металлических эмалированных пластинках с лунками при температуре (18-30)гр.С. На бортиках пластинки против каждой лунки записывают номер исследуемой сапной крови.
В начале работы ставят контроль антигена с позитивный сапной сывороткой и с негативной сывороткой крови лошадей, а также контроль антигена на спонтанную агглютинацию (к 0,03 куб.см антигена добавляют 0,03 куб.см сыворотки или физиологического раствора). Исследуемые сыворотки крови в дозе 0,03 куб.см вносят на дно лунки при помощи шприца-полуавтомата или микропипетки. После внесения каждой сыворотки шприц-полуавтомат (микропипетку) трижды промывают физиологическим раствором и подсушивают фильтровальной бумагой. В каждую лунку рядом с сывороткой при помощи шприца-полуавтомата или микропипетки вносят 0,03 куб.см антигена. Затем антиген в каждой лунке тщательно смешивают с сывороткой ручным смесителем до получения однородной смеси, распределяя ее по всей поверхности лунки.
Пластинку с сыворотками с антигеном покачивают в течение 4 мин. осторожными вращательными движениями вручную или при помощи аппарата для покачивания диагностических пластинок. Учет результатов реакции проводят визуально через 4 мин. после смешивания сыворотки крови с антигеном при слегка наклонном положении пластинки. Реакцию считают положительной при наличии отчетливо выраженной агглютинации окрашенных сапных бактерий антигена в виде мелких или крупных хлопьев при частичном или полном просветлении жидкости. Реакцию считают отрицательной при отсутствии четкой агглютинации. Агглютинацию, которая возникает позже 4 мин., не учитывают. После учета реакции пластинки и смеситель дезинфицируют погружением их на 5 мин. в 1%-ный раствор хлорамина, затем моют водопроводной водой , ополаскивают дистиллированной водой, высушивают на воздухе и используют повторно. Для проведения дезинфекции и сушки пластинок используют кассеты и штативы-сушилки.
Реакция связывания комплемента.
Физиологический раствор. 2,5%-ная взвесь эритроцитов барана в физиологическом растворе. Кровь у барана берут утром, до кормления, из яремной вены во флакон со стеклянными или металлическими бусами, встряхивают в течение 7-10 мин. и затем фильтруют через марлю. Эритроциты 3-4 раза отмывают физиологическим раствором путем центрифугирования при 2500-3000 об./мин. до полного обесцвечивания промывной жидкости. Из осадка эритроцитов готовят 2.5%-ную взвесь в физиологическом растворе.
Затем по 0,2 куб.см каждого разведения переносят в ряд пробирок, в каждую пробирку добавляют по 0,2 куб.см комплемента в разведении 1:20, 0,2 куб см 2,5 %-ной взвеси эритроцитов и 0,4 куб.см физиологического раствора. Штатив с пробирками встряхивают и помещают в водяную баню на 10 мин. при температуре (37-38)гр.С. Титром гемолизина считают наибольшее его разведение, при котором наблюдается полный гемолиз эритроцитами.
Приготовление гемолитической системы.
Гемолитическую систему готовят смешиванием в равных объемах 2,5%-ной взвеси эритроцитов барана в физиологическом растворе и раствора гемолитической сыворотки, взятой у удвоенном титре (например, пр титре гемолизина 1:1000 берут 2:1000, то есть для приготовления 10 куб.см гемолизина берут 0,2 куб.см гемолизина из ампулы и разводят в 99,8 куб см физиологического раствора).
Полученные 100 куб.см раствора гемолизина приливают при постоянном помешивании к 100 куб.см взвеси эритроцитов. Гемолитическую систему помещают в водяную баню при температуре (37-38)гр.С на 20 мин. для сенсибилизации эритроцитов.
Титрование комплемента проводят перед каждой постановкой реакции. Отбирают необходимое для данного объема исследований количество ампул (флаконов) с комплементом (из расчета 1 ампула или флакон на 100 пробирок реакции), растворяют препарат в физиологическом растворе, количество которого указано на ампуле (флаконе), сливают в одну емкость и перемешивают. Таким образом получают основной раствор комплемента, который хранят в холодильнике на протяжении постановки реакции. Из этого раствора готовят разведение 1:20 для титрования.
Комплемент титруют в бактериолитической системе, для чего позитивную, негативную и 1-2 сыворотки из опыта разводят физиологическим раствором 1:10, инактивируют при температуре (60 62)гр.С в течение 30 мин. и разливают по 0,2 куб.см каждую в два ряда пробирок.
Внесение остальных ингредиентов и условия титрования показаны в табл.1 на примере негативной сыворотки, при этом во вторые ряды сывороток вместо антигена вносят 0,2 куб.см физиологического раствора.
При работе с аппаратом Флоринского для разведения комплемента берут дополнительный ряд пробирок, в которых делают те же разведения комплемента, но объем увеличивают в 10 раз, Затем разливателем Флоринского переносят по 0,2 куб.см разведенного комплемента во все пробирки каждого ряда и вносят остальные ингредиенты.
Титром комплемента в бактериолитической системе считают минимальное количество его, необходимое для полного гемолиза эритроцитов барана в пробирках с негативной сывороткой и сыворотками из опыта с антигеном и без антигена, а также в пробирках с сапной сывороткой без антигена при полной задержке гемолиза в пробирках с сапной сывороткой и антигеном.
Каждую сыворотку крови предварительно проинактивированную, как указано в п.3.2.4., исследуют в трех пробирках: без антигена в разведении 1:5 (контроль сыворотки) и с антигеном в разведении 1:5 и 1:10.
Для этого в первую и третью пробирки разливают физиологический раствор в количестве 0,4 куб.см и 0,1 куб.см соответственно. Затем в первую вносят 01 куб.см испытуемой сыворотки, смешивают и переносят 0,2 куб.см во вторую и 0,1 куб.см - в третью пробирки.
В опытные пробирки вносят по 0,2 куб.см сапного антигена в рабочем разведении в контрольные - по 0,2 куб.см комплемента в установленном титре. Штативы встряхивают и помещают в водяную баню на 20 мин. при температуре (37-38)гр.С.
Затем во все пробирки вносят по 0,4 куб.см гемолитической системы, встряхивают и вновь помещают в водяную баню на 20 мин. при температуре (37-38)гр.С.
Одновременно ставят следующие контроли:
Позитивная и негативная сыворотки в тех же разведениях, что и испытуемые с антигеном и без антигена;
антиген без сыворотки (на антикомплементарность); антиген без сыворотки и комплемента (на гомотоксичность); гемсистема с физраствором.
При массовых исследованиях допускается постановка реакции в одной пробирке с разведением сыворотки 1:10 (0,02 куб.см сыворотки и 0,18 куб.см физиологического раствора). При работе с аппаратом Флоринского к 0,02 куб.см сыворотки добавляют 0,2 куб.см физиологического раствора. Сыворотки с задержкой гемолиза исследуют повторно, как указано выше.
Учет результатов реакции проводят дважды: непосредственно после последнего прогревания пробирок в водяной бане и на следующие сутки после хранения пробирок при температуре (4-8)гр.С.
Сначала учитываются результаты контролей. Если в пробирках с позитивной сывороткой и антигеном, с антигеном без сыворотки и комплемента, с гемолитической системой и физиологическим раствором будет полная задержка гемолиза, а в пробирках с негативной сывороткой и антигеном, с сапной и негативной сыворотками без антигена и с антигеном без сыворотки - полный гемолиз, постановку реакции считают правильной и проводят учет результатов.
Реакцию учитывают по степени задержки гемолиза эритроцитов, которую определяют по шкале, приготовленной перед учетом реакции. Для этого содержимое трех-пяти пробирок с полным гемолизом сливают в одну, затем гемолизированную жидкость и физиологический раствор разливают в пробирки по схеме. Реакцию оценивают в крестах в зависимости от процента гемолизированных эритроцитов:
++++ (4 креста)- полное отсутствие гемолиза;
+++ (3 креста)- гемолиз 25% эритроцитов;
++ (2 креста)- гемолиз 50% эритроцитов;
+ (1 крест) - гемолиз 75% эритроцитов;
(минус) - полный гемолиз.
Диагностическим титром сыворотки считают разведение ее 1:10. При задержке гемолиза эритроцитов в этом разведении сыворотки на ++++ и +++ реакцию считают положительной независимо от результатов реакции с сывороткой в разведении 1:5.
При задержке на ++ и + реакцию считают сомнительной, если задержка гемолиза в разведении сыворотки 1:5 соответствует ++++ или +++.
Во всех других случаях реакцию считают отрицательной.
Патологоанатомическое исследование.
Болезнь протекает с образованием гранулем в легких, на слизистой оболочке носовой полости, гортани, трахеи, на коже, в других органах и тканях с поражением лимфатических узлов. Гранулемы могут подвергаться распаду с образованием рубцующихся язв.
При исследовании вначале осматривают кожный покров животного, разрезают обнаруженные узлы. Затем труп вскрывают без снятия кожи, осматривают слизистые оболочки органов дыхания, обследуют легкие, печень, селезенку, лимфатические узлы головы и других органов.
На слизистых оболочках обнаруживаются узелки, язвы с красным ободком или рубцы, в паренхиматозных органах - светло-серые узелки разной величины, при этом часто изменения наблюдают одновременно и в регионарных лимфатических узлах.
Поражения легких могут быть в виде милиарных узелков, а также в форме мелких и крупных очагов (ацинозная, ацинозно-надозная лобулярная или лобарная пневмания), иногда с кавернами. Обнаруживается также саловидные участки склероза ткани.
Пораженные лимфатические узлы резко увеличены, плотны, могут содержать обызвествленные инкапсулированные узелки, или быть на разрезе однородными, без рисунка, серо-белого цвета. Нередко наблюдается воспаление окружающей узел клетчатки (периаденит) с образованием общего плотного фиброзного узла.
Бактериологическое исследование.
Бактериологическая диагностика включает культуральное и биологическое исследования биоматериала. Для исследования используют подчелюстные, заглоточные, бронхиальные, средостенные лимфатические узлы носовую перегородку, гортань,глотку, трахею, а также измененные участки легкого, печени, селезенки, кожи с подкожной клетчаткой.
·Культуральное исследование.
Из биоматериала делают высев с помощью пастеровской пипетки с грушей или шприца с длинной тонкой иглой (отдельного для каждого органа) в МБП и на МПА с 2-4% глицерина (МПГБ, МПГА), рН 6,8-7,0.
Посевы инкубируют при температуре (37-38)гр.С. Рост обычно появляется на 2-4 сут.
При росте возбудителя бульон мутнеет, на дне появляется слизистый серо-белый осадок, поднимающийся штопором при встряхивании пробирки; некоторые штаммы образуют пристеночное кольцо или пленку на поверхности бульона.
На агаре возбудитель сапа растет в виде гладких полупрозрачных колоний серовато-белого цвета с перламутровым оттенком, сливающихся затем в слизистой налет на поверхности среды.
Для идентификации возбудителя выделенную культуру микроскопируют, мазки окрашивают по Граму, синькой Леффлера (старой) или по Романовскому-Гимза, пересевают на картофельную среду Павловского, обезжиренное молоко, определяют подвижность в висячей капле, а также исследуют в реакции агглютинации на стеле с сапной сывороткой, взятой в разведении 1:10.
Возбудитель сапа представляет собой тонкие зернистые грамотрицательные палочки с закругленными концами, расположенные одиночно или короткими цепочками. При окраске по Романовскому-Гимза и синькой Леффлера отмечают хорошо выраженную зернистость.
При выращивании на картофельной среде Павловского через 2-3 сут. Появляются мелкие полупрозрачные с желтоватым оттенком колонии, которые затем сливаются, образуя слизистый "медовый" налет. Цвет налета меняется от янтарно-желтого в первые 3 сут. Роста до буро-коричневого и красноватого к 6-8 сут.
Возбудитель сапа медленно (на 8-14 сут.) свертывает молоко, неподвижен. Следует отметить значительное выраженное броуновское движение клеток возбудителя в висячей капле.
Большинство штаммов агглютинируется сапной сывороткой.
Выделенную культуру исследуют на биологические свойства.
·Биологическое исследование.
Из отобранных участков биоматериала одновременно с посевом готовят суспензию путем растирания тканей с физиологическим раствором в ступке с соблюдением условий стерильности и вводят подкожно в области шеи трем хомячкам-самцам в дозе 1 куб.см, или трем морским свинкам-самцам в дозе 3 куб.см.
Выделенную из биоматериала культуру вводят двум хомячкам или двум свинкам в тех же дозах.
Срок наблюдения за зараженными хомячками - 12 суток, морскими свинками - 25 суток.
При наличии в биоматериале возбудителя сапа в месте подкожного введения через 3-4 суток образуется язва с уплотненными краями. Больные животные малоподвижны, у них развивается ринит, конъюнктивит, орхит.
Гибель хомячков при достаточной дозе и вирулентности возбудителя наступвет через 5-7 сут., морских свинок - через 8-17 суток. У морских свинок заболевание может перейти в хроническую форму.
Животных с клиническими признаками болезни усыпляют эфиром, вскрывают и проводят высев из сердца, селезенки, печени, семенников на питательные среды, затем исследуют выделенную культуру, как указано в Аналогично поступают с павшими зараженными животными в легких, семенниках обнаруживают геморрагические и некротические узелки.
Гистологическон исследование.
Для гистологического исследования берут измененные кусочки органов и тканей, из которых после фиксации готовят срезы на замораживающем микротоме или после заливки целлоидином (парафином).
Срезы окрашивают гематоксилин-эозином и просматривают сначала при малом увеличении (окуляр х 7, объектив х 10), затем при обнаружении узелков рассматривают их при большом увеличении (объектив х 40 - х 60).
Типичной формой сапного изменения является инфекционная грнулема (узелок) специфического строения. В центре развивающегося узелка обнаруживают нейтрофильные лейкоциты, лимфоциты и эпителиоидные клетки. Дифференцирующим признаком является карипрексис (распад ядер) лейкоцитов.
В стадии инкапсуляции центр узелка представлен глыбчато-зернистым распадом хроматина ядер лейкоцитов и окрашен в темно-синий цвет. Внутренний слой клеточной зоны состоит из эпителиоидных клеток с фибробластами и коллагеновыми волокнами.
Центральная часть обызвествленных узелков окрашена в темно-синий, а некротическая масса - в розовый цвет, Известь выступает в виде глыбок и зерен на общем розовом фоне необызвествленной некротической массы. За соединительтканный капсулой располагаются лимфоидные клетки в виде синеватого ободка.
Помимо узелков, сапные изменения могут проявляться в виде диффузного вопаления с экссудативным и продуктивным акцентом, которое характеризуется наличием очагов лейкоцитарных скоплений с явлениями кариорексиса, или пролиферацией лимфоидных и эпителиоидных клеток.
Изменения слизистой носовой полости могут представлять собой комбинацию узелков, первичных и вторичных язв и рубцов.
Постановка диагноза.
При положительном результате хотя бы одного из следующих методов исследования: клинического осмотра, глазной маллеиновой пробы, исследования сыворотки крови в РА или РСК животных считают подозреваемыми в заболевании сапа.
Диагноз на сап считают установленным в следующих случаях:
Положительная маллеиновая проба, подтвержденная результатом патологоанатомического исследования.
Обнаружение характерных для сапа изменений во внутренних органах и тканях.
Выделение культуры из патологического материала со свойствами, характерными для возбудителя сапа.
Получение положительных результатов биологического исследования, даже если культуры возбудителя из исходного материала не выделены.
Дифференциельный диагноз.
Носовую форму сапа необходимо отличить от мыта, а кожную - от эпизоотического лимфангита. При мыте развивается гнойное воспаление слизистой оболочки носовой полости без образования язв и происходит абсцедирование подчелюстных лимфоузлов. При микроскопии гноя обнаруживаются мытные стрептококки. При эпизоотическом лимфангите в гное язв обнаруживают криптококков. При всех неясных случаях проводят глазную маллеинизацию.
Лечение животных, больных сапом, запрещено, их уничтожают.
Иммунитет при сапе нестерильный. Попавшие в организм сапные бактерии фагоцитируются нейтрофилами и макрофагами, но фагацитоз при сапе незавершенный, а фагоцитированные бактерии не погибают. Роль гуморальных факторов также незначительная. Основную защитную роль играет способность организма купировать возбудителя в сапных узелках с последующим обызвествлением патологического фокуса. Средств для специфической профилактики сапа нет.
Профилактика и меры борьбы. Всех восприимчивых к сапу животных (лошадей, мулов, ослов, верблюдов) за 2 нед до передачи другим хозяйствам, отправки на выставки, спортивные состязания, перевозки по железной дороге или другим видом транспорта, а также до убоя на мясо подвергают клиническому исследованию на сап и маллеинизации. Вновь поступивших в хозяйство животных содержат в профилактическом карантине, в этот период проводят клинический осмотр и маллеинизацию. Все поголовье однокопытных животных во всех категориях хозяйств подвергают клиническому осмотру на сап и маллеинизации один раз в год.
В случае возникновения сапа хозяйство (ферму) объявляют неблагополучным и накладывают карантин. Запрещают передачу однокопытных животных другим хозяйствам, вывоз фуража, перегруппировку лошадей внутри хозяйства, а также убой восприимчивых животных на мясо. Животных с характерными для сапа клиническими признаками, а также не имеющих клинических признаков болезни, но положительно реагирующих на маллеин, признают больными сапом, немедленно изолируют и уничтожают вместе с кожей.
Животных, подозреваемых в заражении, через каждые 15 дней исследуют на сап методом глазной маллеинизации до получения трехкратных отрицательных результатов по всей группе. Клинические осмотры проводят раз в 5 дней. Организуют для них индивидуальное кормление и водопой. Проводят механическую очистку и дезинфекцию неблагополучных помещений и территории вокруг них. Навоз, подстилку и остатки корма из помещений, откуда были выделены больные животные, сжигают. Навоз от животных, подозреваемых в заражении, подвергают биотермической обработке в течение 2 мес. Текущую дезинфекцию проводят через каждые 15 дней (после каждой маллеинизации), а в изоляторах, где содержатся больные животные, - каждый день.
Дезинфекцию проводят 3 %-ным р-ром формалина, 3 %-ным горячим (70 °С) раствором едкого натра, взвесью хлорной извести, содержащей 3 % активного хлора.
|
